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【原理】
利用吸附柱提取RNA作为模板，在反转录酶的作用下，以引物为起点合成与RNA 模板互补的cDNA链；然后在DNA 聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环，使特异DNA 片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA 片段进行电泳、染色后，在紫外灯下，肉眼可见DNA 片段的扩增带。
【试剂盒组份】
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1. 生理盐水
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20mL
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8. 吸附柱和收集管
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10套
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2. 裂解液
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6mL
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9. 0.2 mL 薄壁PCR 管
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15个
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3. 洗涤液A
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7mL
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10. RT-PCR 反应液A
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180μL
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4. 洗涤液B
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7mL
|
11. RT-PCR 反应液B
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50μL
|
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5. 洗脱液
|
500μL
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12. 50 倍TAE 电泳缓冲液
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20mL
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6. 阴性对照
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300μL
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13. 染色液
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10μL
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7. 阳性对照
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300μL
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注：塑料袋内试剂（阳性对照、RT-PCR反应液A和B）-20 ℃冻存，裂解液2-8℃冷藏，其他室温保存。
【操作方法】
一、样品制备
1 样品采集：病死或扑杀的猪，取扁桃体、淋巴结等组织病变部与健康部交界处组织；待检活猪，用注射器取血5 mL，2～8 ℃保存。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融。）
2 样品处理：
2.1 组织样品的处理：称取组织0.1g于研磨器中磨碎，再加1mL生理盐水继续磨至无块状物；然后将样品转至1.5 mL灭菌离心管中，8000 rpm离心2 min，取100 µL上清于1.5 mL 灭菌离心管中。
2.2 全血样品的处理：待血凝后取100 µL血清于1.5 mL 灭菌离心管中。
2.3 阳性对照的处理：取阳性对照 100 µL于1.5 mL 灭菌离心管中。
2.4 阴性对照的处理：取阴性对照100 µL于1.5 mL 灭菌离心管中。
二、病毒RNA的提取
1. 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入450µL裂解液，充分颠倒混匀，室温静置3min 。
2. 加入275µL无水乙醇，轻轻混匀。
3. 将混合液吸入吸附柱中（吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），10,000 rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。
4. 向吸附柱中加入500µL洗涤液A，10,000 rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。
5. 向吸附柱中加入500µL洗涤液B，10,000 rpm 离心1min，弃去收集管中液体，套回收集管。
6. 空柱10,000 rpm 离心2 min。
7. 将吸附柱移入新的无RNA酶的1.5 mL离心管中，在膜中央加入30µL洗脱液，室温静置2min，10,000 rpm 离心1min，获得总RNA。
三、RT-PCR
1. 反应体系：分别取14µL RT-PCR反应液A（用前混匀）、4µL RT-PCR反应液B（用前混匀）和2µL模板RNA，混匀。
2. 反应程序：在PCR仪上运行以下程序：42 ℃ 45 min，94 ℃ 3 min ；94 ℃ 30 s 、55℃ 30 s 、72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃延伸10 min。
四、电泳
1. 制胶：用50倍稀释的TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶。
2. 电泳：待胶凝固后，取5µL PCR扩增产物点样于琼脂糖凝胶孔中，以5V/cm的电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳。
3. 染色：取50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液30mL，加入10µL染色液，混匀后将胶浸泡30min，于紫外灯下观察结果。
【结果判断】
阳性对照出现380bp扩增带，阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现380bp扩增带为猪瘟病毒阳性，否则为阴性。
【需用但未提供的材料】
组织研磨器、眼科剪、眼科镊、一次性注射器、琼脂糖、经焦碳酸二乙酯（DEPC ）处理的灭菌1.5mL 离心管和吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）。
【注意事项】
1．本试剂盒有效期为6个月，不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的组分不要混用。
2．所有试剂应在规定的温度储存，使用时拿到室温下，使用后立即放回。
3．注意防止试剂盒组分受污染。使用前将塑料袋内试剂瞬离15s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
4．严格按试剂盒说明书操作可以获得的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。
5．RNA提取过程中，应戴口罩、勤换手套，尽量缩短操作时间。
6．所有接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。
【生产企业】 广州健仑生物科技有限公司【联系电话】 13710007117 13802525278 020-82574011
【公司传真】 020-32206070
【电子邮件】 Service@jianlun.com
【腾讯 QQ 】 712628580 712628581 712628582
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【营销中心】 广州市中山大道中358号东溪商务大厦B座511室
【公司地址】 广州市天河区车陂第十五工业园一幢4067室
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编码
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产品名称
|
产品规格
|
检测方法
|
|
猪病检测系列
|
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JL0101
|
伪狂犬病毒抗体检测试剂盒
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96T/盒
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ELIJL
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|
JL0104
|
伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0102
|
伪狂犬病毒抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL0103
|
伪狂犬病毒抗体乳胶凝集试剂
|
100T/盒
|
乳胶凝集法
|
|
JL0105
|
伪狂犬病毒PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL0201
|
蓝耳病病毒抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0202
|
蓝耳病病毒抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL0203
|
蓝耳病病毒抗体乳胶凝集试剂
|
100T/盒
|
乳胶凝集法
|
|
JL0204
|
猪蓝耳病毒RT/盒-PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL0903
|
猪瘟病毒抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0902
|
猪瘟病毒抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL0904
|
猪瘟病毒抗原金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL0905
|
猪瘟病毒RT/盒-PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL0801
|
猪口蹄疫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0802
|
猪口蹄疫抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL1901
|
圆环病毒抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL1902
|
圆环病毒抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL1903
|
猪圆环病毒PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL0301
|
细小病毒抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0302
|
细小病毒抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL0303
|
细小病毒抗体乳胶凝集试剂
|
100T/盒
|
乳胶凝集法
|
|
JL0501
|
乙型脑炎抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0502
|
乙型脑炎抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL0503
|
乙型脑炎抗体乳胶凝集试剂
|
100T/盒
|
乳胶凝集法
|
|
JL0504
|
乙型脑炎病毒RT/盒-PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL0701
|
猪衣原体抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL0702
|
猪衣原体抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL1001
|
猪支原体抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL1002
|
猪支原体抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL1201
|
弓形虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL1202
|
弓形虫抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL1301
|
旋毛虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL1302
|
旋毛虫抗体金标检测条
|
50T/盒
|
金标试纸条
|
|
JL1303
|
旋毛虫抗原金标检测条
|
50T/盒
|
金标试纸条
|
|
JL1401
|
猪囊虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL2001
|
家畜血吸虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL2002
|
家畜血吸虫抗体金标检测卡
|
50T/盒
|
金标试纸条
|
|
JL2201
|
包虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL2302
|
猪流感病毒抗原金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
广州健仑生物科技有限公司 电话： 020-82574011 手机： 13802429590 传真： 020-28216107
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|
编码
|
产品名称
|
产品规格
|
检测方法
|
|
禽病检测系列
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|||
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JL0 0101
|
鸡新城疫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL00102
|
鸡新城疫抗原金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL00103
|
鸡新城疫抗体金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL00104
|
新城疫血凝及血凝抑制试验抗原
|
2ml
|
用于禽新城疫免疫效果的监测
|
|
JL00105
|
新城疫血凝及血凝抑制试验阳性血清
|
2ml
|
|
|
JL00106
|
新城疫病毒RT/盒-PCR检测试剂盒
|
10T/盒
|
PCR
|
|
JL00401
|
法氏囊抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL00402
|
法氏囊抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL00403
|
法氏囊抗原金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL00601
|
鸡传染性喉气管炎抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL00602
|
鸡传染性喉气管炎抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL00701
|
鸡减蛋综合症EDS76抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL00702
|
鸡减蛋综合症EDS76抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL00801
|
鸡病毒性关节炎抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL01001
|
禽流感抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL01002
|
禽流感抗原金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL01003
|
禽流感H5抗原金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL01004
|
禽流感H9抗体金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
广州健仑生物科技有限公司 电话： 020-82574011 手机： 13802429590 传真： 020-28216107
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编码
|
产品名称
|
产品规格
|
检测方法
|
|
犬检测系列
|
|||
|
JL10101
|
犬狂犬病抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10102
|
犬狂犬病抗原金标检测卡
|
20T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL10201
|
犬恶心丝虫抗体检测试剂盒
|
48T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10301
|
犬肺吸虫病抗体检测试剂盒
|
48T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10401
|
包虫病抗体检测试剂盒
|
48T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10501
|
尿液快速检测试剂条
|
100T/盒
|
金标试剂条
|
|
JL10601
|
犬弓形虫抗体检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10602
|
犬（猫）弓形虫抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL10603
|
犬（猫）弓形虫抗原检测试剂盒
|
96T/盒
|
ELIJL
|
|
JL10701
|
犬细小抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL10702
|
犬细小抗原金标检测卡
|
10T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL10801
|
犬瘟热抗原金标检测卡
|
10T/盒
|
金标层析卡
|
|
JL11001
|
犬衣原体抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
JL11101
|
犬支原体抗体金标检测卡
|
40T/盒
|
金标渗滤卡
|
|
广州健仑生物科技有限公司 电话： 020-82574011 手机： 13802429590 传真： 020-28216107
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