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广州健仑生物科技有限公司

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H7N9检测试剂
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产品: 浏览次数:245H7N9检测试剂 
品牌: 健仑
产品型号: H7N9检测试剂广东厂家
产品规格: 96T
最小起订量: 1 盒
供货总量: 5000000 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2017-06-30 10:25
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详细信息
 H7N9禽流感病毒核酸荧光PCR测定试剂盒
Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit
H7N9禽流感病毒试剂产品经理电话专线:18925052681  QQ:712628581    
【产品名称】
通用名称:禽流感病毒H7N9核酸测定试剂盒
英文名称:Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit
【包装规格】 25T/盒
【预期用途】通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测,可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。
【检验原理】本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术结合荧光探针技术,对禽流感H7N9特异性核酸片段进行荧光PCR检测。
【试剂盒主要组成成份】
序号
组分
数量
体积/人份
1
H7N9核酸荧光PCR检测混合液
480?l×1
19?l
2
RT-PCR酶
28?l×1
1?l
3
DEPC-H2O
400?l×1
4
阳性对照品
30?l×1
 
说明:不同批号的组分不可以互换使用。
自备试剂:Trizol;氯仿;75%乙醇;异丙醇或磁珠法RNA提取试剂;本公司可以代为订购或提供销售商联系方式。
【储存条件和有效期】 试剂盒应在-20℃及以下温度避光保存,有效期12个月。采用冰盒行运输;荧光PCR检测混合液反复冻融不宜超过3次。
【适用仪器】 本试剂盒适用于ABI7000ABI7300ABI7500ABI7900MJ-chromo4MX3000PMX3005PSmartCyclerⅡ,Rotor-Gene6000Lightcycler R480iCycleriQ4iCycleriQ5Bio-Rad CFX96SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管(含0.4ml灭菌生理盐水),用无菌棉球将试管塞紧后,密闭送检。标本可立即用于检测,也可保存于-20℃待测。【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化(取得许可证)的RNA提取试剂盒处理标本,具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l样品置于1.5ml 离心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100?l氯仿, 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次; 13000rpm离心15min, 吸取上层液体,加入等体积异丙醇,颠倒混匀室温静置10min, 13000rpm离心10min,轻轻倒去上清;加入700?l 75%乙醇,颠倒洗涤,13000rpm离心5min,轻轻倒去上清,倒置于吸水纸上,弃尽液体或4000rpm离心5sec,将管壁上的残余液体甩到管底部,用微量加样器尽量吸干液体,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA
2.试剂配制
n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR(n为反应管数),振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中,然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中,盖好管盖,立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上,推荐循环参数设置:
45×10min; 95×15min;循环一次,再按95×15sec→60×60sec,循环45;单点荧光检测在60℃,反应体系为25?l
荧光通道检测选择:选用FAM通道。
备注:如使用ABI系列PCR仪,请务必于passive reference 和 quencher处均选择none
5. 阈值设定
阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-H2O的点。
6. 质量控制:试剂盒各对照品须达到以下要求,否则实验视为无效。
Ct值
FAM通道(检测H7)
HEX/VIC/JOE(检测N9)
DEPC-H2O
UNDET或45
UNDET或45
阳性对照品
≤35
≤35
 
7. 试验结果的判断
通道
Ct值
结果判断
1
FAM+HEX
UNDET或45
样本低于检测限,报告为阴性
2
FAM+HEX
≤43
FAM通道为H7基因阳性;
HEX/VIC/JOE通道为N9基因阳性
3
FAM+HEX
43~45
复检一次,如仍为43~45,则报告为阴性
 
进行定量检测时,仪器生成标准曲线后,自动显示待检样品定量值。
【参考值范围】阴性(检测对象H7N9为病原微生物,在健康人体中不存在)。
【对检验结果的解释】实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
【检验方法的局限性】当检测样本中被检核酸浓度含量低于检测限5×103copies/ml时可能会发生假阴性的结果。
【产品性能指标】检测限:1×103copies/ml
【注意事项】 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
1. 整个检测过程应严格分在三区进行:PCR反应体系的配制区;标本处理、加样区;PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立。实验后即请清洁工作台,并进行消毒。
2. 使用不含荧光物质的一次性手套经常替换) 、一次性离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。
3. 试剂准备和标本处理应使用超净工作台负压式或防污染罩,以防止对环境污染。
4. 每次实验应设置阴、阳性对照品。
5. 操作人员应经过专业培训,具有一定经验和操作技能。
6. 操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或75%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。
7. 实验中接触过标准品和对照品的废弃物品(如吸头)、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
8. 试剂使用前应在常温下充分融化并混匀。
9. PCR反应混合液应避光保存。
10. 反应管中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧。
11. 不同批号的试剂请勿混用,请在有效期内使用试剂盒。
 【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司

  H7N9型禽流感是一种新型禽 人感染H7N9禽流感疫情防控方案(版) 卫生部《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(版)》已确定了PCR核酸检测作为H7N9禽流感确诊手 段。据悉2013年4月2日,国家CDC 已经启 动物流程序,将检测H7N9禽流感病毒的核 酸检测PCR试剂探针及引物下发至各地方 CDC和各个诊断实验室,以保证H7N9的准确诊断。 流感,于2013年3月底在上海和安徽两地率先发现, 4月2日江苏又报告4例确诊病例。此次人感染的H7N9禽流感病毒是发现的亚型流感病毒,尚未纳入我国法定报告传染病监测报告系统,目前国内外尚无针对H7N9禽流感病毒的疫苗。

    世界动物卫生组织(OIE)规定,禽流感病毒的检测采用鸡胚病毒分离培养及致病力测定。国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会已联合发布8项有关禽流感病毒检测的国家标准中,通用的《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》和针对H7亚型的《H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》都是基于核酸检测的原理。荧光RT-PCR检测禽流感病毒系列方法,是利用分子生物学手段,检测高致病性禽流感病毒核酸,无须做鸡胚病毒分离培养,可将检测时间从原来的21天缩短为4个小时。

检测技术已经从定性检测发展到实时荧光定量检测。针对有些临床需要,除能够依据阴阳性判断确证病例以外还可以依据核酸的载量判断感染程度。

    根据国家标准,H7N9禽流感病毒的核酸检测采用的荧光RT-PCR检测需要实时荧光定量PCR仪用于定量检测,或PCR基因扩增仪用于定性检测,以及依据H7N9人感染禽流感的核酸特定序列研制的基于引物和探针的PCR检测试剂盒。
    据悉2013年4月2日,国家CDC 已经启动物流程序,将检测H7N9禽流感病毒的核酸检测PCR试剂探针及引物下发至各地方CDC和各个诊断实验室,以保证H7N9的准确诊断。

广州健仑生物科技有限公司(www.jianlun.com)10多年来一直专注核酸检测,PCR基因扩增仪,实时荧光定量PCR仪等仪器和试剂的研制,在国家重点科技计划等项目的支持下已有多个产品获得注册证,成为SARS、H1N1等疾病的法定检测设备,这些仪器和试剂产品都是进行H7N9禽流感病毒核酸检测的必备内容。

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