广州健仑生物科技有限公司

β2糖蛋白I IgM ELISA试剂盒

预期用途

此试剂盒基于酶联免疫法，用于人血清或血浆中抗抗β2糖蛋白ⅠIgM的检测和半定量检测，用于辅助检测特定的自身免疫紊乱，抗磷综合征，系统性红斑狼疮，类狼疮紊乱．

实验原理

微孔包被板上包被有纯化的β2糖蛋白Ⅰ抗原，加入稀释血清或血浆和标准品去微孔中，如存在特异性的抗β2糖蛋白ⅠIgM抗体，就会与固相的抗原结合．洗板去除非结合物质，再加入酶联物，形成抗体－抗原　复合物．洗板去除多余的酶联物，加入TMB底物液．让酶联物催化反应一段时间后，加入终止液终止酶反应．显色的强度与样品中抗β2糖蛋白ⅠIgM的量成正比．在酶标仪处读取结果，结果与标准品作平行对照．

存储及稳定性

1存储于2 - 8°C

2微孔板于带干燥剂的密封袋中．建议初次打开后，四周内用完

3试剂至有效期内稳定

4存储或使用过程中，避免接触热源，阳光或强光．

样品收集及处理

1收集全血，然后分离血清

2样品在2 - 8°C下可保存7天．冰冻可保存6个月．血清样品避免反复冻融．

提供材料

1微孔板条：包被有β2糖蛋白Ⅰ抗原　　　　　　　　　　　　　　12 x 8孔

2吸附剂：　黑盖(仅用于IgM检测)　　　　　　　　　　　　　60 ml/瓶

3浓缩洗涤液：20倍浓宿　　　　　　　　　　　　　　　　　　50 ml/瓶

4TMB底物液: 琥珀色瓶                                                                        12 ml/瓶

5酶联物：红色溶液                                                                                12 ml/瓶

6标准品：100 SMU　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　160 µl /每瓶

7质控品：阴性和阳性质控　　

　　　　　　　　　浓度范围见标签                                                   160 µl /每瓶

8终止液：1.5 N酸性溶液(HCl / H₂SO₄)                                                   12 ml/瓶

 

实验前准备

1洗涤液准备(1x)

　加蒸馏水或去离子水至20倍浓缩的洗涤液，形成总体积为1L的即用(1x)洗涤液．

2将样品和试剂平衡至室温(20- 25°C)，使用前轻轻摇匀．

3标准曲线准备(系列标准品准备)．建议24小时内用完稀释标准品系列

　

加10 µl　标准品至1 ml的吸附剂中，制成标准品A (100 SMU)，再取500µl标准品A加入到500µl的吸附剂中(即等量混匀)，制成标准品B．按此规律，依次从浓度高的标准品中取500µl加入到500µl的吸附剂中，制成标准品C-F．具体如下图所示：

实验步骤

1取实验所需微孔板条至板架上

　预洗板－用稀释洗涤液重复洗板3次

2加5 µl样品或质控品至500 µl的吸附剂中，混匀(即按1：101稀释)

3各加100 µl的稀释血清，系列标准品和质控品至相应微孔中．轻扣板边去除气泡并混匀．室温下孵育30分钟

4倒掉微孔内的所有液体，用稀释洗涤液重复洗板3次

5各加100 µl酶联物至各孔中，室温下孵育30分钟

6倒掉所有酶联物，用稀释洗涤液重复洗板3次

7各加100 µl TMB底物液至各孔中，室温下孵育30分钟

8各加100 µl终止液至各孔中终止反应

　读数前，确保无气泡产生

9酶标仪处450 nm读取OD值

结果计算

1在log-log 或log-lin坐标纸上，以标准品的浓度为X轴，OD值为Y轴，建立标准曲线

2利用所测的样品OD值，得出相应的浓度．

3典型的标准品数据

质控说明

1每次实验都应检测阳性和阴性质，所测浓度必须在标签上所示的范围内．

2零标准品(即吸附剂)的OD值必须低于0.150，　浓度为100SGU的标准品，OD值应大于0.750

可用已知浓度的人血清样品作为额外的质控品，置于–20°C保存．

结果分析与说明

建议每个实验室依据自身的技术，质控，仪器，患者人群，建立自身正常范围值，以下为参考范围值：

阴性：< 15  SMU

弱阳性：15   ~ 30 SMU

中等阳性：30   ~ 70 SMU

强阳性：  > 70 SMU

阳性结果表明可能患有特定的自身免疫紊乱．阴性结果表明没有抗β2糖蛋白ⅠIgM抗体或低于检测灵敏度．

本译文为广州健仑生物科技有限公司技术人员编译，仅供参考，详情请以英文原文为准。