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犬粪包虫抗原检测试剂盒
使用说明书
【原理】
本试剂采用ELISA方法用于犬粪便中包虫抗原的检测。
【试剂组成】
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1.预包被板 |
48T/96T; |
7. 样本稀释液(5号液) |
1支; |
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2.酶结合物(1号液) |
1支; |
8. 终止液(6号液) |
1支; |
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3.浓缩洗涤液(2号液) |
1支; |
9. 阳性对照品 |
1支; |
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4.底物(3号液) |
1支; |
10.阴性对照品 |
1支; |
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5.显色剂(4号液) |
1支; |
11.不干胶膜 |
1/2片; |
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6.2X浓缩粪便处理液 (7号液，用前以蒸馏水等体积稀释) |
1支; |
12.自封袋 |
1个; |
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13.使用说明书 |
1份 |
【操作程序】
1. 样品处理 犬粪样品需要预先低温(-70℃以下)冷冻7天以上，以灭活虫卵。称取1克犬粪,加入1ml已稀释的粪便处理液，充分搅拌混匀，静置10分钟，再经5000rpm离心30分钟，取上清液检验。
2. 洗涤液配制 用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液(2号液)按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。
3. 加样反应 每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔；其中阴、阳对照孔分别加入阴性、阳性对照各100ul，空白对照孔加入样品稀释液(5号液)2滴。其它各样本检测孔先滴加样品稀释液(5号液)各1滴，再取犬粪上清液50ul加入板孔中。37℃下避光反应30分钟，甩去孔内液体。用已稀释的洗涤液洗涤4次，每次静止1分钟，拍干。
4. 加酶反应 除空白孔外，各孔加酶结合物2滴。37℃下避光反应30分钟，甩去孔内液体。用已稀释的洗涤液 洗涤3次，每次静止1分钟，拍干。
5. 显色反应 加底物液(3号液)和显色剂(4号液)各1滴，混匀，37℃避光显色10分钟。加终止液(6号液)1滴，终止反应(加终止液后，蓝色会变为黄色)并判读结果。
【结果判断】
阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。
以空白对照调零，用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度(A值)。待检孔A值大于阴性对照A值平均值的3.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.10时按0.10计算。
【注意事项】
1.试剂盒于2-8℃保存，有效期12个月。每次使用前应先平衡至室温。
2.未使用完的板条应密封保存。
3.试剂盒中终止液具有腐蚀性，要小心使用。
4.瓶盖每次使用后要拧紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组分不可混用。
5.应采集新鲜的犬粪样本进行测试。若不能及时检测，应将粪样放置低温冻存，防止腐败或反复冻融。如犬粪难以溶解，应适当捣碎处理。任何样本都应作为传染源来处理。
6.37℃孵育时，建议使用水浴箱。如无条件，可使用湿盒放入温箱并同时用不干胶膜封盖板孔。
7.浓缩洗涤液及浓缩粪便处理液若出现结晶时，应置37℃至溶解。
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