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【用途】
用来检测鸡血清中的禽传染性病毒(IBV)抗体
【试验原理】
临床上，传染性是一种急性、高度传染的病毒性疾病，任何日龄的鸡都可以感染。IBV的潜伏期为24-72小时。疾病侵害鸡的呼吸系统和泌尿系统。青年鸡表现为急性呼吸道症状及气管损伤。死亡率可高达。血清中的病毒抗体可通过酶联免疫的方法检测。血清中的IBV抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用ELISA方法进行监测。
将灭活的抗原包被在微孔板上，加入稀释后的血清并孵育，血清中的抗IBV抗体将与包被在微孔板上的IBV结合，形成IBV抗原-抗体复合物。然后洗掉未结合的物质，加碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG的酶标结合物至微孔板中，酶标物将与IBV抗原-抗体复合物结合。孵育后洗掉未结合的结合物，然后加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶反应并生成一种黄色的产物，终止反应，将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪（405-410nm）测定。
【一个微孔板所需的试剂的量】
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抗原包被微孔板 |
12×8条（板） |
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样品稀释液（1×） |
120ml |
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洗涤液（1×） |
500ml |
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阳性对照 |
2μl |
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阴性对照 |
2μl |
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结合物 |
12ml |
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底物液 |
12ml |
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终止液 |
12ml |
【所需物品】
1. 能够吸取2μl、100μl和800μl的精确移液器
2. 吸取100μl的多通道移液器
3. 计时器
4. 量筒
5. 蒸馏水
6. 洗板机
7. 稀释用容器
8. 能够读双波（405-410nm和630-650nm）的酶标仪，OD值读数可达到3.0
【样品收集】
采集至少0.5ml全血，分离血清并放在冰箱里，2-7℃用于短期储存，如果长期储存，应冷冻，且避免反复冻溶。如果样品含有可见的颗粒物质，应在检测之前将其离心除去，严重污染的样品不允许使用（如高度浑浊、细菌污染等）
【结果计算】
将阳性对照吸光度值和样品吸光度值分别减去阴性对照吸光度值，注意：对照品及样品吸光度值都应该是2个重复孔的平均值。每个样品的计算式如下：
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样品平均吸光度值 － 阴性对照吸平均吸光度值 |
＝样品与阳性对照比值（Sp） |
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阳性对照平均吸光度值 － 阴性对照平均吸光度值 |
Sp ×（100）＝ ELISA Unit (EU) 阳性对照值设为100 EU
【结果判定及EU单位说明】
IBV ELISA 值 说明
小于10EUs IBV抗体为阴性
10-15 EUs IBV抗体为弱阳性，应被认为经过免疫或暴露于IBV，油乳状疫苗也可能引起非特异性低水平抗体。
15-75 EUs IBV抗体适度阳性
＞75 EUs IBV抗体强阳性
【操作步骤】
1. 将试剂回温至室温，通过颠倒和涡旋将试剂混匀。
2. 将1份4×样品稀释液加入到含3份去离子水的容器中，充分混匀，例如，30ml 4×样品稀释液加入到90ml去离子水中。
3. 将1份20×洗涤液加入到含19份去离子水的容器中，充分混匀，例如，25ml 20×洗涤液加入到475ml去离子水中。
4. 稀释前将阳性对照、阴性对照和样品震荡均匀。
5. 阳性对照、阴性对照和样品均需要用样品稀释液稀释后使用。稀释比例为2μl ：800μl。将移液器调到100μl，反复吹打4次使之充分混匀。
6. 将稀释后的阴性对照、阳性对照分别加入微孔中，每种做两个平行，每孔100μl；将稀释后的样品100μl分别加入孔中，室温下静置30分钟。
7. 弃去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗涤液洗涤，重复洗涤2次，在洗涤过程中防止酶标板变干。
8. 每孔立即加入100μl结合物，室温静置30分钟。
9. 重复步骤7进行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室温静置30分钟。
11. 不要倒掉板内液体，每孔立即加入100μl终止液。
12. 用酶标仪双波读数（405nm或410nm作为主要波长，630nm或650nm为参考波长），计算结果。
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什么是鸡传染性？
鸡传染性是由传染性病毒引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。其临诊特征是呼吸困难、发出罗音、咳嗽、张口呼吸、打喷嚏。如果病原不是肾病变型毒株或不发生并发病，死亡率一般很低。产蛋鸡感染通常变现产蛋量降低，蛋的品质下降。本病广泛流行于世界各地，是养鸡业的重要疫病。
