广州健仑生物科技有限公司

 呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）说明书

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用途

用于定性检测有症状病人鼻冲洗液或鼻咽拭子标本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫层析试验。该试验旨在用于新生儿或5岁以下儿童呼吸道合胞病毒感染的体外诊断。建议阴性结果做细胞培养进一步证实。

摘要和解释

RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常见原因，也是婴幼儿患细和肺炎的主要原因。RSV在每年的秋天、冬天和春天有规律的发生，出现感染和暴发。虽然RSV在较大儿童和成人可引起显著的呼吸道疾病，但比婴幼儿缓和的多。为了获得有效的抗菌治疗，RSV的快速鉴定诊断就显得特别重要。快速鉴定可以减少住院时间，减少抗菌素的使用，减少住院治疗费¹。

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）提供了一种简便快速检测鼻洗液和鼻咽拭子标本中的 RSV的方法。由于它的简便快速性，有助于做出治疗和住院的决定。

测试原理

     呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种用鼻洗液和鼻咽拭子标本检测RSV融合蛋白抗原的免疫层析膜试验。抗RSV抗体，样本线，吸附到硝酸纤维素膜上，对照抗体作为第二条线吸附到同一膜上。抗RSV和对照抗体结合到可视粒子上，这种粒子干燥结合到惰性纤维支持物上。形成的结合物垫和有条纹的膜结合形成检测条。检测条置于一个硬纸盒的右边，这个硬纸盒是一个书形的绞链的检测装置。拭子标本（对照和病人的）需要一个预备步骤，鼻洗液标本不需要预备。执行试验时，测试样本加到检测条的顶部的白垫上，闭合检测装置。标本中的存在的RSV抗原与抗RSV抗体结合物结合，形成的抗原结合物复合物被固定的抗RSV抗体捕获，形成样本线。固定的对照线抗体捕获一个可视的结合物，形成一条粉红色的对照线。对照线在未检测的装置中是蓝色的。试验结果用可视的检测的粉红色到紫色线的存在与否来解释。阳性结果，在15分钟读数时，会出现一条样本线和一条对照线。阴性结果，在15分钟读数时，只出现一条对照线，表明样本中未检测到RSV抗原。对照线未出现，或仍为蓝色，表示无论样本线出现与否，测试无效。

试剂和材料

提供的材料

检测卡：包被有鼠抗RSV抗原特异抗体和对照线抗体的膜与鼠抗RSV抗体结合物和对照线抗体结合物结合在一个折合式检测卡上。未检测的膜在对照线区域有一条蓝色线。

移液管：固定体积（100μl）的移液管用于将样本转移到检测装置中。只能用Binax提供或能转移100μl样本体积的校正管。

阳性对照拭子：灭活的RSV干燥结合到拭子上。

阴性对照拭子；灭活的A群链球菌干燥结合到拭子上。

对照拭子用的瓶装洗脱液：盛有一定体积（0.5ml）洗脱液，用于洗脱对照拭子。不要使用其他洗脱液。

未提供的材料

时钟、秒表或跑表；鼻洗液收集容器，鼻咽拭子，运输媒介。

可选物品

鼻咽（NP）拭子标本附件包：

鼻咽拭子：用于呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的无菌泡沫拭子。

用于拭子标本的洗脱液小瓶：

瓶中盛有一定体积的洗脱液（0.5 ml），用于处理要测试的拭子标本。

注意事项

1．  体外诊断用。

2．  使用前要将检测装置密封在锡箔中。

3．  不要使用过期的试剂盒。

4．  不要将不同批号试剂盒的试剂混合使用。

5．  检测条顶部的白色样本垫盛有从病毒中提取靶抗原的试剂，为了保证操作，加样时将标本慢慢加到垫的中央，以使所有样本都吸附到垫上。

6．  RSV阳性对照拭子是用灭活的RSV感染组织培养细胞准备的，随后用生物测定程序进行了测试。测定时要遵守注意事项。样本可能有感染性，应当根据地方、州和联邦的法规建立处理和处置措施。

7．  检测中加入的试剂不足时会出现无效结果。为确保加入足够量的体积，在将吸管中的内容物加到样本垫上时，要确定移液管的下部是充盈的、没有气泡产生。如果有空气存在，通过挤压上部的吸球，将标本排回到容器中，重新吸入标本。必要时，换一个新吸管。

8．  测试鼻洗液标本时，吸样本时要避开粘液部分。如果吸管堵塞，致使下部柄部不充盈，通过挤压上部的吸球把标本排回到容器中，重吸样本，必要时换一个新吸管。

9．  聚酯、人造纤维、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易弯曲的柄，评估发现这些都可用于呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）。不要用藻酸钙鼻咽拭子。

10．  所有移液管和洗脱瓶都是单次使用的，不要用于多个样本。

贮存和稳定性

试剂盒在室温（59-86℉，15-30℃）保存，呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）在失效期前是稳定的。失效期标注在外包装和盒内。

标本采集和处理

为了取得结果，请使用新鲜鼻咽拭子或鼻洗液标本。

鼻咽拭子：

聚酯、人造纤维、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易弯曲的柄，评估发现这些都可用于本试剂盒。将收集后的拭子标本在1小时内加入到0.5~3.0ml的适宜的液体转移系统中。如果不能立即测定，洗脱液拭子标本可在室温保存4小时，或2-8℃保存48小时。测试前将标本平衡至室温，并轻轻旋动。

鼻洗液：

用与病人年龄相称的操作，在标准采样杯中收集洗液标本。如果不能立即测定，洗液可在室温保存4小时，或2-8℃保存48小时。测试前将标本平衡至室温，并轻轻旋动。洗液标本可在测试前加入到3.0ml的适宜的液体转移系统中。转移介质可导致洗液稀释，这种稀释可能像操作部分报道的那样降低试验敏感性。

转移介质：

下列转移介质受过测试，适用于本试剂盒。

Amies介质

Binax洗脱液

Hank^,s盐平衡液

M4介质

M4RT介质

M5介质

盐水

Stuart^,s介质

质量控制

日常质量控制：

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）内嵌有操作对照。作为日常质量控制，Binax建议每次试验都要记录这些对照结果。

操作对照

A．未检测装置在对照位置有一根蓝色线。如果进行试验试剂起作用了，检测装置中的这根蓝色线将变为粉红色。

B． 结果窗口中清晰的背景颜色是阴性背景对照，15分钟内窗口背景颜色会从粉红色到白色。背景颜色不应干扰测试。

外部阴阳性对照：

建议用阴阳性对照确保：

l  所用试剂有效

l  试验操作正确

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）内装有阴阳性对照拭子。这些拭子将监控试剂故障。阳性对照确保测定准确。每打开一个新试剂盒都要测试这些拭子，其他对照遵照下列要求做：

l  地方、州和/或联邦法规

l  遵照集团和/或本试验室的标准质量控制程序

为了正确指导质量控制操作，请参阅NCCLS EP12A和42CFR493.1202(C)（美国用户）。

如果未得到正确的质控结果，请不要报告病人结果，在工作时间联系Binax技术部（EST）。

样本准备步骤

鼻洗液：

鼻洗液样本不需要预备，直接进入测定程序。

鼻咽拭子：

在0.5-3.0ml的液体转移系统中转动洗脱拭子，进入测试程序。注意：如果在Binax洗脱液中洗脱拭子，按照下列程序预备对照拭子。

对照拭子：

1．  试剂盒内盛有装满洗脱液的小瓶，将瓶盖开启。

2．  将欲测试拭子放入瓶中，将拭子在液体中转动3圈。

3．  将拭子按在瓶壁上转动，使样本从拭子中移出。

4．  扔掉拭子。

5．  尽早检测液体样本，进入检测程序。

测试程序

1．  测试前将装置从锡箔中取出平放在工作台上。

2．  将移液头插入液体样本中，挤压上部吸球吸液。当吸液头部注满液体后松开吸球，这将会把液体吸入移液管中。移液管下部不要产生空气。

3．  看检测装置上的箭头找到白色样本垫，通过挤压上部吸球，慢慢将移液管中液体全部（100μl）加入到样本垫的中部。

4．  立即从检测装置中揭去粘附衬，合上并密封装置，15分钟时读窗口中的结果。早于或晚于15分钟结果可能不准确。

注意：读结果时，如有必要，将装置倾斜以减少眩光。

结果解释

对阴性标本，窗口底部的蓝色对照线变紫红色，无其他线出现。

对阳性标本，蓝色对照线变紫红色，上部的样本线也变紫红色。

如果对照线仍为蓝色或根本没有出现，试验结果无效。

对无效试验，用一新的检测装置重做。如果问题没有解决，电告Binax技术部。

美国：18002579525  美国以外；+16096278000

结果报告

建议报告结果

阳性

RSV抗原阳性。活病毒存在时可能出现阳性结果。

阴性

RSV抗原阴性。由于RSV不能被排除的感染，样本中的抗原可能在检出限以下。Binax建议对阴性样本做培养。

局限性

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）检测活的和死的RSV。测试结果与标本中的抗原量有关，可能与用同一标本做细胞培养所得结果不一致。

标本采集量不足或病毒排出水平低可能出现差一点的结果，甚至可能出现假阴性结果。

阴性结果不能排除RSV感染，也不能排除造成呼吸道感染的其他病毒的感染。因此，所得结果要结合临床结果作出准确诊断。Binax测试结果在用palivizumab治疗的病人中还没进行评估。

然而一项分析研究表明palivizumab干扰呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）检测RSV的能力。

抗菌素和干扰素的干扰潜力还未确定。

单克隆抗体可能不能检测所有抗原变异株或新株RSV。

预期值

RSV的流行年年不同，在秋、冬季暴发。RSV的阳性检出率受许多因素影响，包括标本采集方法，所用试验方法，地理位置，特定区域的流行。2002年Binax临床研究中，在洗液标本中RSV的平均流行是2%，咽拭子标本中是4%。2003年收集的鼻咽拭子标本中RSV的流行是21%。

性能数据

分析研究

分析反应性

已知2个亚群的RSV，每个亚群都保留有呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）作为靶位的融合蛋白²。

6株A亚群分离菌和5株B亚群分离菌用呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）测试为阳性，测试的浓度范围为1.56×10¹TCID₅₀/ml到5.00×10⁴TCID/ml。

注意：已报道的TCID₅₀/ml水平是由一系列因素决定的，包括：使用的细胞培养系，传代数目，各种分离菌的数目。

分析特异性（交叉反应性）

为了测定呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的分析特异性，测试了48株可能共栖存在在鼻腔或鼻咽部的病原微生物（28株细菌，20株病毒）。所有下列微生物在浓度大于1×10⁵TCID₅₀/ml（病毒）或大于1×10⁸/ml（细菌）时，结果是阴性的。肺间质病毒在2×10³TCID₅₀/ml测定没有交叉反应性。

细菌	病毒
不动杆菌属	腺病毒5*
百日咳鲍特氏菌	腺病毒7*
白色假丝酵母菌	巨细胞病毒*
粪肠球菌	冠状病毒*
大肠埃希氏菌	柯萨奇病毒B4*
阴道加德纳氏菌	甲型流感   2/日本/305/57
流感嗜血杆菌	甲型流感/香港/8/68
肺炎克雷伯氏菌	甲型流感/Aichi/68
格氏乳酸杆菌	甲型流感/PR/8/34
嗜肺军团菌	甲型流感/维多利亚/3/75
产单核细胞李斯特菌	甲型流感1/FM/1/47
卡他莫拉菌属	乙型流感 Allen/45
淋病奈瑟氏菌	乙型流感 Lee/40
脑膜炎奈瑟氏菌	乙型流感 Mass/3/66
干燥奈瑟氏菌	乙型流感 Maryland/1/59
浅黄奈瑟菌	乙型流感台湾/2/62
普通变型杆菌	肺间质病毒

 

 

细菌	病毒
铜绿假单胞菌	副流感病毒1*
黏质沙雷菌	副流感病毒2*
金黄色葡萄球菌	副流感病毒3*
金黄色葡萄球菌(产蛋白A株)
表皮葡萄球菌
A群链球菌
B群链球菌
C群链球菌
F群链球菌
变异群链球菌
肺炎链球菌

*这些病毒株是从美国收集获得的(ATCC)，带有滴度信息，但滴度没被Binax验证。

干扰物质；

下列物质，自然存在于呼吸道标本或由人工导入鼻腔或鼻咽部，经测评，在下列浓度未发现对呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）造成影响。

 

物质	浓度
全血	2%
3OTC嗽口液	25%
3OTC喉腔滴液	25%
3OTC鼻雾化剂	25%
4acetamidophenol	10mg/ml
乙酰水杨酸	20mg/ml
albuterol	20mg/ml
扑尔敏	5mg/ml
美沙芬	10mg/ml
苯海拉明	5mg/ml
愈创木酚甘油乙醚	20mg/ml
oxymetazoline	10mg/ml
Phenylephrine	100mg/ml
苯丙醇胺	20mg/ml
Rebetol eq \o\ac(○,R)R	500ng/ml
Relenza eq \o\ac(○,R)R	20mg/ml
金刚烷乙胺	500ng/ml
Tamiflu eq \o\ac(○,R)R	100mg/ml

 

临床研究

鼻洗液—临床特异性（前瞻性研究）：

2002年流感期间，在遍及全美的医生办公室和诊所对呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）结果和细胞培养结果进行了多中心比较研究。鼻洗液标本是从呈现RSV样症状3天左右的儿童或成人采得，并且用呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了评价。试验人群女性约占46%，男性约占54%。该研究中的病人不包括从登记之日起6个月内接种过流感疫苗的病人，也不包括30日内服用过流感或RSV药物的病人。没有无效结果被报道。191份鼻洗液标本分4组测试。呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）总特异性是98%，总测试一致性是98%，95%可信区间如下所示。

鼻洗液培养基    

                  +      －

3	3
1	184

NOW eq \o\ac(○,R)R   +

结果     －

 

95%CI特异性=98%（184/187）（95.4%  99.4%）总一致性=98%(187/191)(94.7%  99.1%)

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）在4个测试点相似操作，如下表所示

	阳性分数	特异性
	NOW eq \o\ac(○,R)R/培养	NOW eq \o\ac(○,R)R/培养	%	95%CI
地点1	1/1	91/94	97	91.1-98.8
地点2	2/3	83/83	100	95.7-100
地点3	0/0	6/6	100	59.0-99.6
地点4	0/0	4/4	100	47.8-99.5

鼻洗液—临床敏感性和特异性（回顾性研究）：

自从在前瞻性研究中少量阳性培养基证实有RSV感染产生以来，进行了一次回顾性研究，如下所示。用呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）对47份RSV培养阳性标本和12份RSV培养阴性标本的鼻洗液进行了评估。所有标本均来自一所大学医学中心，所有病人都住在美国东北部。试验人群男性占约49%，女性约占51%。呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）敏感性是89%，然而试验特异性是，总试验一致性是92%，95%可信区间如下所示。

培养

               +      －

42	0
5	12

NOW eq \o\ac(○,R)R   +

结果     －

 

敏感性=89%（42/47）（77.3%-95.3%）

特异性=（12/12）（75.3%- 99.8%）

总一致性=92%(54/59)(81.6%- 96.2)

鼻咽拭子敏感性和特异性(前瞻性研究)：

在2002年和2003年流感季节，在美国一家研究中心对呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）结果与细菌培养结果进行了比较研究。鼻咽拭子标本取自有RSV或流感症状的儿童。在用呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）评价前所有拭子标本都放入0.5-3ml的转移介质中。试验人群中女性占43%，男性占57%。测试了179份鼻咽拭子标本，全为有效标本。呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的试验敏感性、特异性和总一致性与培养/FDA比较是93%。95%可信区间如下所示。

培养/DFA

              +      －

25	1
2	142

NOW eq \o\ac(○,R)R   +

结果     －

 

敏感性=93%（25/27）（76.5%-97.7%）

特异性=93%（142/152）（88.3%- 96.4%）

总一致性=93%(167/179)(88.6%- 96.1)

呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）在所有试验点相似操作，如下表所示。

地点	敏感性
	#	%	95%CI
1	14/15	93	69.8-98.4
2	9/10	90	58.7-97.7
3	0/0	NA	NA
4	2/2	100	29.2-99.2

            

地点	特异性
	#	%	95%CI
1	69/74	93	85.1-97.0
2	20/23	87	67.6-95.3
3	16/18	89	66.9-96.6
4	37/37	100	90.7-99.9

 

重复性研究：

在3个独立的地点将包括阴性、弱阳性、阳性的标本编码分组，利用呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行单盲研究。参与者在3天内对每一标本进行多次测试。234份标本得到预期结果，95%可信区间为98.4-。

参考文献

1）  Williams, KM, Jackon MA, Hamiliton M. Rapid Diagnostic Testing for URIs in Children: Impact on Physician Decision Making and Cost. Infect. Med. 19(3): 109-111, 2002.

2）  Lopez, Juan A., R. Bustos, C. Orvell, M. Berois, J. Arbiza, B. Garcia-Barreno, J.Melero. Antigenic Structure of Human Respiratory Syncytial Virus Fusion Glycoprotein. Jr. of Virology, vol. 72, no.8, August 1998, pp.6922-6928.

定购信息

序列号：

#430-000：呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）（42人份/盒）

#430-022：呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）（22人份/盒）

#400-065： BinaxNOW eq \o\ac(○,R)R Nasopharyngeal Swab Accessry Pack（20根拭子/盒）

#430-080： BinaxNOW eq \o\ac(○,R)R RSV Control Swab Kit

【生产企业】

企业名称：Binax, Inc.

生产地址：10 Southgate Rd, Scarborough, Maine 04074 USA   邮编：04074 

售后服务单位：

【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司
【联系电话】 020-82574011 13802525278 13710007117  
【公司传真】 020-32206070
【电子邮件】 Service@jianlun.com
【公司网址】 www.jianlun.com 
【营销中心】 广州市中山大道中358号东溪大厦B座511室
【公司地址】 广州市天河区车陂第十五工业园一幢4067室

【产品标准编号】

【说明书批准及修改日期】

2011年3月14日